血红蛋白纯化

蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤:（一）材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性,所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎,常用的破碎组织细胞的方法有:1. 机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎,常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等,2. 渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎,3. 反复冻融法 生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破,这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法,4. 超声波法 使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎,5. 酶法 如用溶菌酶破坏微生物细胞等,(二) 蛋白质的抽提通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来,抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定,如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100等）,使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离,在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性,

蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来,每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白,